1. 组织源: XXXX周龄(或月龄)小鸡 或成鸡
2. 性别:
3. 消毒方法:
4. 等待时间: (组织脱离组织源后到酶解开始的等待时间)
5. 培养用液
基础培养基:DMEM (High-glucose)
添加因子:10% FBS; Insulin 5ug/ml; Human EGF 25ng/ml; Penicillin 100ug/ml; Streptomycin
100U/ml.
6. 消化用液
成分: 0.1% Collagenase-2(2%), 0.1% Dispase (100mg/ml, 10%)
时间:
温度:
7. 培养基本操作方法
a. 小鸡用温水清洗,表面喷70%酒精消毒,无菌解剖,取肠组织;
b. 无菌PBS清洗6-8次,将肠内表面外翻,酒精浸泡5-10min;
c. 无菌PBS清洗3次,用含双抗的无菌PBS清洗2次;
d. 手术线系住两端,加入10ml酶消化液(0.1% Col-2, 0.1% dispase),37°消化1.5小时;
e. 充分吹打细胞消化液,使肠内表面组织、细胞尽量脱落;
f. 取出鸡肠组织,1000rpm离心5min,弃上清液,加无菌PBS清洗并离心两次;
g. 弃上清,往沉淀中加2ml完全培养基,重悬细胞后接种至6孔板,37°5%CO2培养箱中培养观察。
8. 提供4-6张有代表性的照片 (以jpg形式电子版并同时粘贴到这个文档)
9. 鉴定方法: (如果有鉴定请列举所用方法和抗体)