1.组织源:6周龄胚胎胃组织
2.性别:男
3.消毒方法:无菌含双抗PBS
4.等待时间:10h
5.培养用液
基础培养基:DMDM
添加因子:15%FBS;Penicillin;Streptomycin.
6.消化用液
酶消化液:0.25%Trypsin&0.2%Collagenase-2(胃粘膜细胞);0.2%Collagenase-2(胃平滑肌细胞)
时间:37℃15min消化;4℃下过夜消化
7.培养基本操作方法
胃粘膜细胞:
a.胃用无菌PBS清洗2次,用含双抗的无菌PBS清洗2次;
b.将胃壁外翻,至于含混合酶的15ml离心管中,37℃消化45min-1h;
c.将胃壁充分洗涤吹打,使胃粘膜细胞脱落,收集消化液,补加无菌PBS至12ml,1000rpm离心5min;重复一次;
d.弃上清,往沉淀中加2ml完全培养基,重悬细胞后接种至25cm2培养瓶,37℃5%CO2培养箱中培养观察。
胃平滑肌细胞:
a.将消化后的胃组织剪碎成1mm2组织块,加入酶消化液37℃消化45min-1h;
b.200目滤网过滤,收集滤液,1000rpm离心5min,重复一次;
c.弃上清,往沉淀中加2ml完全培养基,重悬细胞后接种至25cm2培养瓶,37℃5%CO2培养箱中培养观察。