血清是基础培养基中极为重要的细胞生长和粘附因子、激素、脂质和矿物质来源。此外,血清还可调节细胞膜通透性,并可作为向细胞内运送脂质、酶、微量营养素和微量元素的载体。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。
胎牛血清( Fetal Bovine Serum)是通过无菌手术剖腹后取胎,穿刺心脏采血制成。胎牛血清中所含的对培养细胞有害的成分(抗体等)最少,故质量最高。
血清原料
母牛在怀孕五至八月龄胎 时,将胎牛取出并进行心脏 穿刺取血。穿刺取血可较大 程度的避免外界的污染。
血清用途
是细胞培养中重要的天 然培养基,含有丰富的细胞 生长必须的营养成份,常用 于动物细胞的体外培养。
血清获得量
一个3月龄的胎牛可产生 150mL左右的血清,6月龄 和9月龄的胎牛可分别产生 350mL和550mL左右的血清。
血清获得量
一个3月龄的胎牛可产生 150mL左右的血清,6月龄 和9月龄的胎牛可分别产生 350mL和550mL左右的血清。
胎牛血清供应商与牛肉加工商签订 合同,在特定时间收集胎牛血,因母牛 的妊娠周期影响,血清原料来源每年只 能获得两次。
作为畜牧业的副产品,产量十分有限, 受到天然环境、食物卫生、经济条件及 疫情等各种因素的影响,优质的胎牛血 清就更加稀有。
胎牛血清 生产工序
1、原料采集
对怀孕8个月左右的 母牛进行剖腹产,因子 宫收缩极快,故在胎牛 取出的同时要快速缝合, 然后进行心脏穿刺采血。
2、原料加工
将采集好的原血尽 快放入冷冻离心机中, 离心后收集血清,冻 存。
3、质量检测
做好原血清解冻工作, 热风均匀循环解冻后过 滤,避免病原微生物的 污染。此过程会对血清 检测和定级。
4、分装运输
无菌过滤的血清立即 无菌装瓶,成品血清分 装贴标后需迅速储存在 -20℃以下快速冷冻24 小时以上。
胎牛血清检测标准
1、外观观测
人眼目测品质优良的血清通常 会偏棕黄色或是琥珀黄,澄清透 明,轻摇无沉淀。
2、微生物检测
牛血清制品应过滤除菌后制 成,不能含有牛腹泻病毒,不能 含有噬菌体、支原体、真菌污染。
3、总蛋白含量
测量血清中蛋白质总含量可确认动 物的年龄及符合产品的规格,血清中 蛋白质含量应该在3.5%~5%(w/V)。
4、 内毒素
内毒素会因为启动补体活性而 产生细胞毒性,血清中细菌内毒 素含量不应高于5EU/ml.
5、 血红蛋白
血红蛋白含量不高于20mg/dl, 决定血清色泽的因素是血红蛋白和 胆红素,前者含量高,则呈现偏红 的颜色,后者高则呈现为金黄色。
6、 渗透压
胎牛血清渗透压的检测一般采 用冰点法,渗透压摩尔浓度 (mOsmol/kg):280-360之间。
7、免疫球蛋白
免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄 情况,好的胎牛血清不含IgM,IgG的含量也较低。 可以通过血清蛋白电泳SDS检测。
8、其他
不管是国产还是进口血清,都是不测抗生素的 (无四环素胎牛血清除外),若抗生素血清中残 留很高,对细胞培养极为不利,血清质量也不好。