正确选择透析膜
透析成功进行的关键是在适当的条件下选用最合适的膜.选择时可参照下列6步:
◆根据目的选择膜的等级(生物技术或标准)
◆根据溶液的化学特性选择膜材质(CE,RC)-参见化学相容性表格
◆根据使用方法选择产品类型(管状,即用性)
◆根据溶质分子量在18种MWCO中选择
◆根据处理量在多种尺寸(即用型透析装置)或多种宽度(管状)中选择
◆根据目的选择膜预处理方式
最关键的选择
◆正确选择合适的截留分子量
截留分子量的选择是以预留在膜内的大分子的分子量和将要被除去的小分子污染物的分子量为基础的。使用Spectra/Por 膜时,为达到合理有效的分离,需分离的两种物质分子量的比率至少为25.
选择截留分子量的经验法则:选择截留分子量约为要保留的大分子分子量的一半,以获得至少90%的保留率.
◆膜的化学相容性表格
化学相容性表格主要用作使用指导,不作为化学相容性的保证.温度,浓度,长时间曝光等因素的改变可能影响产品的使用.建议您自设条件进行测试.
◆正确选择扁平宽度
透析管扁平宽度的选择取决于样品的体积和透析容量.较小的透析管更快;较大的透析管因扩散距离较长透析较慢.为易于使用,建议使用总长(包括闭合夹和顶部空间)为大约10-15厘米的膜管.
膜的使用:
下述透析程序是一个普通的基础透析过程.在开始透析之前应考虑到许多变数.透析样品溶剂\膜的化学相容性、膜的截留分子量,透析溶剂、透析体积、温度等变量都会影响透析速率,因此,一些应用中下述过程可能需要适当变化。
1、把适量的透析液(缓冲液)加入Spectra/Por透析装置。透析液的体积应为样品体积量的100倍。(例如:在一升液中透析10毫升的样品)
2、裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度(约占总样品体积量的20%)作为头部空间。
3、释放安全锁打开闭合夹。把透析管插入打开的闭合夹,在约超出闭合夹3-5毫米的位置再夹住。不要折叠纤维素酯(CE)膜。
4、由透析管开口端将样品装入。调整一下顶部空间的长度,夹紧闭合器。
5、把透析样品放在合适的透析缓冲液中。
6、往透析装置中放入一个干净的磁性搅拌子。要确保磁子足够大能够搅动整个透析液,但不能大到无法自由旋转。把透析装置放置在搅拌器上,调整到不把样品拉下旋涡的最大速度。
7、透析要求根据具体的应用要求。通常情况,允许过夜透析。在持续透析的过程中,至少要进行3次全部更换透析液。建议在(透析后)2-4小时,6-8小时和10-14小时(第2天早晨)更换透析液。在最后一次透析液的更换后要至少继续进行2小时的透析。
注:对于高浓度污染物,样品可能需要较长的时间透析,透析液需要更频繁的更换。
8、抓住超出闭合夹部分的透析管,打开闭合夹。慢慢倒出透析样品或用吸管,注射器把样品移走。非常小的样品也可用24号注射针刺穿透析管吸取样品。
透析温度主要取决于样品。温度限制主要取决于膜的类型。CE可以承受的温度高达37℃,RC可以承受的温度高达60℃。
膜的贮存和保质期:
干燥的膜要在室温或4℃储存在聚乙烯袋中。未开封的湿膜4℃储存。一旦变湿,膜应浸泡在下列之一的溶液总:0.05%叠氮化钠,1%的苯甲酸钠或1%甲醛。(备注:一旦变潮湿,不要让膜干燥。不断干燥会造成孔隙借口不可恢复的倒塌。)
在适当的储存条件下,保质期为两年。为保证湿膜的最长保质期,防腐剂溶液应当定期更换。