内毒素:内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分,叫做脂多糖。脂多糖对宿主是有毒性的。虽然内毒素紧密地嵌入细胞壁中,但也会不断地向周围环境释放内毒素,这种释放不仅仅是因为细胞的解体和死亡造成的,也会发生在正常细胞生长和分裂过程中。
内毒素不是蛋白质,因此非常耐热。在100℃的高温下加热1小时也不会被破坏,只有在160℃的温度下加热2到4个小时,或用强碱、强酸或强氧化剂加温煮沸30分钟才能破坏它的生物活性。与外毒素不同之处在于:内毒素不能被稀甲醛溶液脱去毒性成为类毒素;把内毒素注射到机体内虽可产生一定量的特异免疫产物(称为抗体),但这种抗体抵消内毒素毒性的作用微弱。
内毒素对细胞培养的影响
细胞形态
内毒素可以改变细胞的外形,例如肝细胞外形改变并引发其吸收六碳糖的能力降低。在含有内毒素的培养基中培养细胞时,细胞形态会发生明显变化,如细胞体积缩小、细胞折光性降低。
激活免疫反应
内毒素可以与细胞膜上的受体结合,引起免疫反应,激活组织内的炎性细胞和炎症因子的释放。它还可能触发细胞的炎症反应,影响细胞的生长、健康和实验结果。
影响细胞功能
内毒素对细胞的功能有显著影响,包括改变细胞的能量代谢和蛋白质合成。此外,内毒素还可以干扰胰岛素的信号转导途径,从而影响细胞的能量代谢和蛋白质合成。
影响细胞生长
内毒素对细胞的生长和功能有负面影响,尤其是在细胞培养过程中,可能导致实验中的错误结论。不同内毒素和不同细胞系之间的毒性程度各不相同。
影响基因表达
内毒素可以刺激白细胞培养物产生组织因子、激活鼠巨噬细胞,以及通过极低水平的内毒素抑制鼠类红细胞集落形成等一系列指标。
影响转染效率
内毒素会对原代细胞和敏感培养细胞的DNA转染过程造成重要影响,高内毒素会与DNA竞争转染试剂,从而减少质粒DNA的摄取量,导致转染效率下降。
内毒素在不同细胞系中的毒性程度存在显著差异。一些细胞系对内毒素的敏感性非常高,甚至在内毒素浓度低于1 ng/mL的情况下就会表现出失调现象。例如,癌性肠上皮细胞T84和Caco-2对内毒素不具有反应性,而SW620和HT29细胞在内毒素刺激下能分泌IL-8等细胞因子。此外,一些历史悠久的细胞系如HeLa和CHO细胞,随着时间的推移可能被自然选择为耐内毒素。
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