标本要求
1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
操作程序
1. 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)
320 ng/L | 5号标准品 | 120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液 |
160 ng/L | 4号标准品 | 120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液 |
80 ng/L | 3号标准品 | 120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液 |
40 ng/L | 2号标准品 | 120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液 |
20 ng/L | 1号标准品 | 120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液 |
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加样:1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗TXB2抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)待测样品孔:加入样本40ul,然后各加入抗TXB2抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
7. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。
9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
操作程序总结:
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
检测范围:
检测范围:10ng/L -320 ng/L
保存条件及有效期:
保存:2-8℃。
有效期:6个月(2-8℃)。
使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测大鼠血栓素B2(TXB2),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
用途:用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中血栓素B2(TXB2)测定。
工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中大鼠血栓素B2(TXB2)水平。向预先包被了大鼠血栓素B2(TXB2)单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠血栓素B2(TXB2),温育;温育后,加入生物素标记的抗TXB2抗体。再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠血栓素B2(TXB2)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 |
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封板膜 | 2片(48) | 2片(96) |
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密封袋 | 1个 | 1个 |
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酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品640 ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
链霉亲和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
生物素标记的抗TXB2抗体 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 |
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