山羊端粒酶(TE)酶联免疫分析(ELISA)检测原理-其它资料-资讯-生物在线

山羊端粒酶(TE)酶联免疫分析(ELISA)检测原理

作者:北京雅安达生物技术有限公司 2014-08-19T00:00 (访问量:1739)

实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中山羊端粒酶(TE)水平。用纯化的山羊端粒酶(TE)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入端粒酶(TE),再与HRP标记的端粒酶(TE)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的端粒酶(TE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中山羊端粒酶(TE)浓度。
样本处理及要求
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀(北京雅安达生物技术有限公司),应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分(北京雅安达生物技术有限公司)。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,(北京雅安达生物技术有限公司)但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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