实验细胞保持正常状态是实验成功的基石。您在蛋白表达敲低、药物处理或特殊培养细胞之后,是否有过第一次实验结果令您特别兴奋、却在之后的重复实验中发现了偏差而令您的心情一落千丈的经历?这是这跟您样本中死亡细胞的水平有关。这也是我们今天想要说的一个话题——定期检测细胞活性,随时关注细胞状态。即便这组数据不是您课题中所必须的,但它却是您控制实验的有效手段。
细胞活性是指样本群体中健康细胞所占的比例。细胞活性的检测对于观察实验过程中细胞的生理状态是必须的。细胞活性会受环境因素影响,包括细胞培养各参数的改变、药物和生长因子的刺激以及在各种疾病下作出的反应。例如,癌细胞表现出细胞活性加强,进而引起细胞异常增殖及逃避细胞凋亡,与之相反的是,神经退行性和其他组织退行性疾病则以进行性细胞丢失为特征。损伤和感染也会对细胞存活产生负面影响,导致坏死或凋亡。以上,细胞本身的健康与疾病之间的关系案例,警示我们在不同实验背景和模型系统中测量细胞活性十分必要。
科学家们已经开发了用于不同实验平台的多种检测细胞活性的技术。具体来说,细胞检测可以根据检测原理进行分组,包括细胞增殖、质膜完整性、代谢活性和线粒体功能。我们除了通过活性检测快速查看细胞群体的总体健康状况,还可以达到更深层的需求,就是通过它来确定活性受损时细胞的死亡方式 - 细胞凋亡还是坏死。
XTT 检测(XTT Cell Viability Kit #9095)是一种可用于检测细胞活性的代谢性检测方法。在健康细胞中,XTT 通过线粒体酶转换成橙色的甲瓒染料。接着通过检测 450 nm 处的相对吸光度来估计活细胞数量。这种方法的优点之一是操作简单, 不需要细胞固定、通透或二次检测方法,并且能够在分析后还能继续检查细胞。
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