2020年7月20日,在医麦客举办的2020 BPIT生物创新技术大会上,和元首次对外公布了基于百亿级丰度的AAV突变库筛选系统:AAVneOTM system;通过对AAV的改造和筛选,优化AAV生产效率,提升产量,提高纯度,降低用量 ,降低免疫原性,提升感染能力,提升药物靶向能力, 为发现更高效的病毒载体提供可能。
腺相关病毒,简称AAV,是一种高效、安全的体外及体内基因转导工具。尤其在整体水平研究上,与其他病毒工具载体相比,AAV具有感染过程温和和长效表达能力,因此成为基因操作的利器。
根据衣壳蛋白的蛋白结构和所结合的细胞外受体分子的不同,AAV可以分为数十种血清型。每种血清型的AAV组织感染嗜亲性各不相同,表现出一定的器官靶向特异性。由于目前常用的AAV外壳具有趋向性,导致其使用受到了限制,因此我们需要寻找新的AAV衣壳(AAV血清型突变体)。
目前,用于筛选AAV血清型突变体的方法有以下四种:
- DNA重组和随机突变(包括DNA shuffling 和采用易错PCR的方法来获得)
- 从自然界中挖掘
- 肽段插入(在cap区域随机的加入一段氨基酸序列)
- 基于计算机的溯源性模拟设计。
和元AAVneOTM system是基于肽段插入的方式筛选AAV的突变库:
筛选方法:
技术优势:
- 插入片段采用最新的合成技术, 提高库的构建效率,提升筛选效率 ;
- 载体深度优化,得率更高 ;
- 自研Cre小鼠实验平台,快速开展体内筛选和验证 ,非人灵长类动物和类器官应用,全方位提高筛选精度 ;
- 文库涵盖多种血清型的插入序列的随机组合;
- 全方位工艺优化,提升AAV产率和纯度;
库的应用
- 筛选高特异性嗜性的新AAV载体,靶向肝脏、心脏、中枢神经系统等基因治疗热门领域;
- 筛选新的低免疫原性的AAV载体;
- 提高AAV感染效率;
- 提高AAV包装效率;
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