1. 透析袋原理 |
技术指标:MWCO(截留分子量),单位:Diatoms 。 |
透析时,小于MWCO的分子在透析膜二边溶液浓度差产生的扩散压作用下渗过透析膜,其速度与浓度梯度、膜面积及温度成正比。欲快速透析可采用直径较小的透析袋以增加膜面积。常用温度:4℃,升温、更换袋外透析液或用磁力搅拌器,均能提高透析速度。 |
2. 透析袋用途 |
透析即用半透膜(透析袋)将大分子蛋白质分离出来。在生物大分子制备过程中除去盐、少量有机溶剂、生物小分子杂质和浓缩样品,透析法最简便。 |
3. 透析袋使用方法: |
① 把透析袋剪成适当长度(10cm左右)的小段。 |
② 取适量透析袋处理液(Fast-Tre Solution)稀释100倍,将透析袋放于其中煮沸10分钟。 |
③ 取出用蒸馏水彻底清洗透析袋。 |
④ 暂不使用的话需要将透析袋完全浸泡到稀释100倍后的透析袋储存液(Long-Sav Solution)中,存放于4度。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 |
⑤ 浸泡在透析袋储存液中的透析袋取出使用前,须将透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净,冲洗三次即可。 |
实验要求不高的可以用简易处理方法:在沸水中煮10min即可使用 |
⑥使用时,一端用下沉透析袋夹子夹紧,灌满水后,用手指适当加压,检查不漏,方可装入样品。通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。装完样品后,用上浮夹子夹紧袋口,可在袋内放一玻璃珠,以使透析袋处于悬浮状态,即可进行透析。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁力搅拌器。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。 |
4. 透析袋相关配件 |
5.透析袋使用中注意事项及技巧 |
透析袋用之前一定要处理; |
1)除盐透析时将高盐的样本加入透析袋中,夹紧,用你选择的保存液进行透析,一般在2-8度透析过夜,中间要更换一到两次透析液,另外透析液体积尽量大些。 |
先把透析液放进容器中(容器的直径小于透析袋长度),再将夹好的透析袋竖直放进去,这样透析袋与透析液的接触面积是最大的,几乎整个透析袋都与透析液接触,溶液的置换面积最大,置换速度最快。 |
如果夹子很稳,那就夹好,先把透析液放进容器中(容器的直径小于透析袋长度),再将夹好的透析袋竖直放进去,这样透析袋与透析液的接触面积是最大的,几乎整个透析袋都与透析液接触,溶液的置换面积最大,置换速度最快。 |
假如夹子夹不稳,那就尽量避免有夹子的一端接触透析液,以免漏出去。把透析液放进容器中(容器的直径小于透析袋长度),再将夹好的透析袋平放进去,这样透析袋与透析液的接触面积不大,大约只有一半的透析袋与透析液接触,置换速度最慢。 |
假如夹子不是特别不稳,那就将透析袋两端回折,夹子夹在回折的中间,这样可以减小漏液的危险,再让透析袋放在容器液面上,夹子向上(容器的直径小于透析袋长度)。要注意定时打湿整个透析袋,不然接触不到透析液的透析袋可能会干裂漏液。 |
透析袋一定不能装满,因为透析液的渗透压低于透析袋内样品,样品中的盐出去的时候透析液也会进来,造成样品的体积增大,严重的时候可能会胀破透析袋,在夹子不稳时会很容易漏液。 |
除了第一次使用,透析袋还是干的,要预处理之外,第二次就不用预处理了。透析袋用完之后要冲洗干净,然后4度保存,要保湿不能干掉。要是干了或者生长微生物,就丢弃,免得影响实验效果。 |
透析的时间不确定,但是勤搅拌(例如磁力搅拌)和勤换洗脱液会加快达到目的的速度。 |
2)蛋白质吸附量,小于1ug/克,(以透析袋干重计)。 |
正常使用PH值5-9(可重复使用)。 |
极限使用PH值2-12(一次性使用)。 |
3)前处理:煮沸5分钟后用蒸馏水60℃洗冲2分钟,置4℃蒸馏水中待用。 |
长期保存液:0。05%-0。1%叠氮钠,1mMEDTA或50%甘油,温度(4℃),使用前以蒸馏水洗净。 |
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