1、组织源:XXXX周龄(或月龄)小鸡或成鸡
2、等待时间:(组织脱离组织源后到酶解开始的等待时间)
3、培养用液
基础培养基:DMEM(High-glucose)
添加因子:10%FBS;Insulin5ug/ml;HumanEGF25ng/ml;Penicillin100ug/ml;Streptomycin 100U/ml.
4、消化用液
成分:0.1%Collagenase-2(2%),0.1% Dispase(100mg/ml,10%)
5、 培养基本操作方法
a. 小鸡用温水清洗,表面喷70%酒精消毒,无菌解剖,取肠组织;
b. 无菌PBS清洗6-8次,将肠内表面外翻,酒精浸泡5-10min;
c. 无菌PBS清洗3次,用含双抗的无菌PBS清洗2次;
d. 手术线系住两端,加入10ml酶消化液(0.1%Col-2,0.1%dispase),37°消化1.5小时;
e. 充分吹打细胞消化液,使肠内表面组织、细胞尽量脱落;
f. 取出鸡肠组织,1000rpm离心5min,弃上清液,加无菌PBS清洗并离心两次;
g. 弃上清,往沉淀中加2ml完全培养基,重悬细胞后接种至6孔板,37°5%CO2培养箱中培养观察。