琼脂糖凝胶回收试剂盒(250preps)
产品名称： 琼脂糖凝胶回收试剂盒(250preps)
英文名称： Gel extraction kit
产品编号： DC3511-02
产品价格： 0
产品产地： 美国圣地亚哥
品牌商标： Biomiga
更新时间： null
使用范围： null
Biomiga（中国）
- 联系人 :
- 地址 : 上海市闵行区吴河路328号A栋2楼
- 邮编 : 201109
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 400-826-1968 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : tech@biomiga.com.cn
产品说明：
本试剂盒可以简单、快速、高效的从琼脂糖凝胶或PCR反应产物中回收DN**段，有效纯化长度在100bp-20kb的片段，回收率高达80-90%。
保存条件：
Buffer GC应避光保存，其他组分室温保存。
使用前请注意：
使用前请分别在DNA Wash Buffer中加入8 mL (DC3511/DC3514-00) 或者60 mL(DC3511/DC3514-01) 或者96 mL (DC3511/DC3514-02) 或者60 mL (DC3511/DC3514-03) 100% 乙醇。
溶解100 mg的琼脂糖凝胶，约需要100 µL Buffer GC。
溶胶液GC 在较低温度下易沉淀，若温度较低，出现沉淀，使用前请在37 oC加热几分钟，至沉淀溶解后再使用。
本试剂盒所有操作步骤均在室温下进行。
用户自备材料:
100% 乙醇
台面离心机和1.5 mL 微型离心管
55-60 oC 水浴(胶回收时用)
真空装置(真空步骤时用)
小于200 bp的片段的可加异丙醇。
PCR产物纯化/胶回收离心法操作步骤：
1. PCR产物纯化：在1倍体积的PCR反应物中加入2倍体积的 Buffer GC，涡旋充分混匀。对小于200 bp的PCR产物，加入5倍体积的Buffer GC。
胶回收：将含DN**段的琼脂糖凝胶切下，转至1.5 mL离心管中，再加入1倍体积的Buffer GC (100 mg的凝胶加入100 µL Buffer GC)。在55-60 oC下培育8分钟左右，且每隔2分种轻弹试管底部，直至胶溶解完全，放置使其冷却至室温。
建议:
为取得最好的实验结果，请使用新鲜配制的电泳缓冲液制胶和电泳。
切胶时，尽量缩短在紫外灯下照射的时间，以减少紫外对DNA的损伤，并尽量切除不含DNA的凝胶。
若DN**段小于200 bp，请加入1体积的异丙醇。
2. 转移700 µL DNA/Buffer GC 混合溶液至离心柱中，室温下，13,000 x g下离心1分种，弃废液，将离心柱放回收集管中。重复此步使剩余的溶液通过柱子。
3. 加入300 µL of Buffer GC到离心柱中，室温下13,000 x g离心30-60 秒，弃废液。
4. 加入650 µL DNA Wash Buffer （确保已将乙醇按说明书要求加入DNA Wash Buffer中），室温下在13,000 x g下离心30秒，弃废液。重复步骤4。
4. 13,000 x g开盖再次离心3分钟，以去除柱中残余的乙醇。
注意：此步操作对DNA的产率多少极为关键。
5. 将柱子放入干净的1.5 mL试管中，向柱中加入在60oC 下预热的30-50 µL Elution Buffer或ddH2O。在室温下放置1分钟。13,000 x g 离心1分种以洗脱DNA。将洗脱液重新上柱，再次离心洗脱。
建议: 将洗脱缓冲液预热到65 oC，加洗脱液后将柱子整个温育5分钟后再离心洗脱可以增加DNA回收效率。
对大于8kb的片段，加洗脱液后将柱子整个温育15-30分钟可以提高回收效率。
PCR产物纯化/胶回收真空/离心法操作步骤
1. 将含DN**段的琼脂糖凝胶切下，转至1.5 mL离心管中，再加入1倍体积的Buffer GC(100 mg的凝胶加入100 µL Buffer GC)。在55-60oC下培育8分钟左右，且每隔2分种轻弹试管底部，直至胶溶解完全，放置使其冷却至室温。
2. 准备真空装置，将柱子与歧管连接。
3. 将 DNA/Buffer GC 混合溶液转移至离心柱。
4. 打开真空装置，溶液流下。
5. 加入650 µL的DNA Wash Buffer漂洗离心柱。
6. 重复步骤5。再真空抽2分种。
7. 将柱子放入收集管，开盖在最高速离心2分种以除去乙醇。
8. 将柱子放入干净的1.5 mL试管中，向柱中加入30-50 µL Elution Buffer或ddH2O。在室温下放置1分种。13,000 x g 离心1分种以洗脱DNA。