Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)

中文名称：Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)
英文名称：Pfu DNA Polymerase
产品规格：200U|1000U
pfu DNA聚合酶简称Pfu酶，是最常用的高保真DNA聚合酶之一。Pfu DNA Polymerase是一种来源于嗜热菌Pyrococcus furiosus的高度热稳定的DNA聚合酶。Pfu酶的分子量为90kDa。Pfu酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同，Pfu酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，Pfu酶有5’至3’外切酶活性，但Pfu酶没有反转录酶活性。

由于Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为2.6×10e-6。Pfu的出错率不仅远远低于Taq酶，也低于一些其它的高保真DNA聚合酶例如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等，因此Pfu酶常作为首选的高性价比的高保真DNA聚合酶。

来源：本Pfu DNA Polymerase为recombinant Pfu DNA Polymerase，通过大肠杆菌表达纯化获得，和纯化获得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性质相同。

用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、双平端PCR克隆等。
1）Pfu酶扩增出来的DN**断为双平端，可以用于双平端克隆，但不能用于常规的T载体克隆。
2）dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介导的PCR扩增反应。

活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30min at 72℃.Enzyme activity is assayed in the following mixture:20mM Tris-HCl (pH8.8 at 25℃),2mM MgSO4,10mM (NH4)2SO4,10mM KCl,0.1% (v/v) Triton X-100,0.1mg/ml BSA,0.75mM activated calf thymus DNA,0.2mM of each dNTP,0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和***酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

酶储存溶液：20mM Tris-HCl (pH8.2),1mM DTT,0.1mM EDTA,100mM KCl,0.1% (v/v) Nonidet P40,0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。

10×Pfu Buffer (with Mg2+)：200mM Tris-HCl (pH8.8 at 25℃),100mM (NH4)2SO4,20mM MgSO4,100mM KCl,1% (v/v) Triton X-100,1mg/ml BSA。

失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Pfu酶失活。

储存条件：-20℃。

注意事项：
1）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Pfu酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2）Pfu DNA polymerase在扩增DN**断时的出错率非常低，但其扩增效率也比较低。对于出错率要求不高的情况，例如RT-PCR进行定量或半定量，推荐使用Taq DNA polymerase。在扩增效率和出错率需要兼顾的情况，可以选择YTTaq DNA polymerase。在扩增2kb以下DN**断时，Pfu酶和Taq酶的扩增效率相近。在准确性要求很高的情况下，须选择Pfu酶。
3）Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此Pfu酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。
4）不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代Pfu酶的PCR Buffer。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！