病毒DNA/RNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

中文名称：病毒DNA/RNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Extraction kit for nucleic acid from virus
产品规格：50次
本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，适合从血浆、血清和其它无细胞体液等样品中分离纯化病毒的DNA或者RNA，本试剂盒特别加入了Carrier RNA，可以从体系中轻松捕获微量核酸，具有方便快捷、产量高、重复性好的特点。所得病毒基因组DNA或RNA无蛋白、核酸酶或其它杂质的污染，可直接用于PCR、酶切、杂交、反转录等分子生物学实验。本试剂盒操作简单、快速，1h内即可获得高纯度DNA或RNA。用于各种病毒DNA/RNA核酸提取，如HCV、HIV、HPV、动物致病性病毒等。

产品特点：
·快速纯化得到高质量病毒DNA和RNA。
·重复性强，产量高。
·无有机抽提或乙醇沉淀。
·完全去除污染物和抑制剂，方便下游应用。

试剂盒组成：

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。Carrier RNA配置成储液后置于-20℃。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．所有的离心步骤均在室温下进行（15-25℃）。
2.将样品平衡至室温。
3.试剂盒中提供的RNase-Free离心管（1.5ml）供第13步洗脱步骤使用，其余离心管需自备。

Carrier RNA溶液的配制如下：
·向装有310μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310μl RNase-Free ddH2O，将Carrier RNA彻底溶解，得到终浓度为1μg/μl的溶液，并按实验情况分装到RNase-Free的离心管中，置于-20℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液，该溶液应避免反复冻融，冻融次数不能超过3次。
·注意Carrier RNA冻干粉不能直接溶解于缓冲液GB中，必须先溶解在RNase-Free ddH2O中，再溶解至缓冲液GB中。
· Carrier RNA工作液：根据样品的数量计算所需缓冲液GB和Carrier RNA溶液的体积（见表1或使用以下公式计算），将缓冲液GB与Carrier RNA溶液颠倒混匀，即得到Carrier RNA工作液；为避免溶液出现起泡现象，请勿使用涡旋振荡。
  如果需要提取大量的样品，可根据以下公式计算：
  n×0.22ml =y ml
  y ml×28μl/ml=z μl
n=同时提取的样品个数，y=需要加入缓冲液GB的体积，z=需要加入Carrier RNA溶液的体积。

表1：步骤3中Carrier RNA工作液的配制：

注意：请将缓冲液GB与Carrier RNA溶液颠倒混匀，即得到Carrier RNA工作液；为避免溶液出现起泡现象，请勿使用涡旋振荡。

使用方法：
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．用移液器将20μl Proteinase K加入一个干净的1.5ml离心管中。
2．向离心管中加入200μl血浆/血清/淋巴液（样品需平衡至室温）。
  注意：如果样本体积小于200μl，可加入0.9% NaCl溶液补充。
3．加入200μl Carrier RNA工作液（为缓冲液GB与Carrier RNA溶液的混合液，配制方法如表1或按照公式计算）。盖上管盖，涡旋振荡15 sec混匀。
  注意：为了保证裂解充分，样品和Carrier RNA工作液需要彻底混匀。
4．在56℃孵育15min。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
5．加入250μl无水乙醇，此时可能会出现絮状沉淀。盖上管盖并涡旋振荡15 sec，彻底混匀。在室温（15-25℃）放置5min。
  注意：如果周围环境高于25℃，乙醇需要再在冰上预冷后再加入。
6．简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
7．仔细将离心管中的溶液和絮状沉淀全部转移至RNase-Free吸附柱CR2（吸附柱放在收集管中），盖上管盖，8000rpm （~6,000×g)离心1min，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
  注意：如果吸附柱上的液体未能全部离心至收集管中，请加大转速，延长离心时间至液体完全转移到收集管中。
8．小心打开吸附柱盖子，加入500μl溶液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），盖上管盖，8000rpm （~6,000×g)离心1min，弃废液，将吸附柱放回收集管。
9．小心打开吸附柱盖子，加入600μl溶液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），盖上管盖，静置2min，8000rpm （~6,000×g)离心1min，弃废液，将吸附柱放回收集管。
10．重复步骤9。
11．小心打开吸附柱盖子，加入500μl无水乙醇，盖上管盖，8000rpm （~6,000×g)离心1min，弃废液。
  注意：乙醇的残留可能会对后续实验造成影响。
12．将吸附柱放回收集管中，12000rpm （~13400×g)离心3min，使吸附膜完全变干，弃废液。
13．将吸附柱放入一个RNase-Free离心管（1.5ml）中，小心打开吸附柱的盖子，室温放置3min，使吸附膜完全变干。向吸附膜的中间部位悬空滴加20-150μl RNase-FreeddH2O，盖上盖子，室温放置5min。12000rpm （~13400×g)离心1min。
  注意：确保洗脱液（RNase-Free ddH2O）在室温平衡后再使用。如果加入洗脱液的体积很小（小于50μl)，为了将膜上的DNA/RNA充分洗脱下来，应注意将洗脱液加到膜的中央位置。洗脱体积可以根据后续的实验要求灵活处理。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！