总巯基测定试剂盒 微量法
产品名称: 总巯基测定试剂盒 微量法
英文名称: Micro Total Mercapto Assay Kit
产品编号: BC1375
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标: Solarbio
更新时间: 2024-12-25T14:11:45
使用范围: null
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产品说明:
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质,而 且参与活性氧清除,后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量,能 够间接测定蛋白质巯基含量。 巯基基团与 5,5’-二硫代-双-**苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处有最大吸 收峰。
自备实验用品: 天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品的制备:
(1) 动物、植物组织:称取约 0.1g,加入 1mL 的提取液,制备成 10%的匀浆,8000g,常温离心 10min,取上清待测。
(2) 血清,培养液:直接测定。
二、测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。
2、 操作表
| 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样品(μL) | 40 | 40 |
|
|
标准品(mL) |
|
| 40 | 40 |
试剂一(μL) | 150 | 150 | 150 | 150 |
试剂二(μL) |
| 10 | 10 |
|
H2O(μL) | 10 |
|
| 10 |
混匀,25℃静置 10min, 1cm 光径玻璃比色皿,双蒸水调零,测定 412nm 吸光值,ΔA=A 测定-A 对照。 |
计算公式
总巯基标准曲线:y = 1.7236 x,R 2 = 0.9994
1. 组织:
(1)按样本质量计算
总巯基含量(μmol/g)= 1.7236 DA ×V 反总÷ (V 样÷V 样总×W)=2.9×ΔA÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
总巯基含量(μmol/mg prot)= 1.7236 DA ×V 反总÷(V 样×Cpr)=2.9×ΔA÷Cpr
2. 血清、培养液:
总巯基含量(μmol/L)= 1.7236 DA ×V 反总÷V 样×103 =2900×ΔA V 反总:反应总体积,1mL;V 样:反应中样品体积,0.2mL;V 样总:加入提取液体积, 1mL; W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;103 :1mmol/ L=103 μmol/ L
注意事项 最低检出限为 10μ mol/L