与杂交方法相比，实时荧光定量PCR方法可以高度灵敏地检测出低丰度的靶miRNA。Signosis应用T7-OLA（寡核苷酸连接）专利技术和SYBR green实时荧光定量PCR技术，开发了一种高灵敏度、高分辨力的实时荧光定量PCR试验方法，可直接对细胞裂解产物中的miRNA表达进行定量分析，无需总RNA提取和cDNA反转录。

A.  产品优势

无需RNA制备——细胞裂解产物可直接用于实验（总RNA亦可）；

分辨率高——能分辨仅有单个碱基差异的miRNA；

实时——分析可以实时监测；

自有专利——应用T7-OLA（寡核苷酸连接）专利技术。

B.   技术原理

靶miRNA分子与两条寡核苷酸（oligo）连接，形成RNA/DNA杂合体。含有生物素（biotin，B）的短序列互补结合到其中的一个oligo上。通过结合有链霉亲和素（Streptavidin）的磁珠分离出杂合体。用DNA连接酶连接两条oligo。单个核苷酸的差异就会阻止杂合体的形成或两条oligo的连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时荧光定量PCR。

C. 原理示意图

D. 结果展示

用miR-17-92基因簇实时荧光定量PCR检测试剂分析HeLa细胞和MCF7细胞中的miRNA17-92基因簇表达情况。

E.      产品应用实例

1)      MicroRNA-17-5p post-transcriptionally regulates p21 expression in irradiated betel quid chewing-related oral squamous cell carcinoma cells. Wu SY, Lin KC, Chiou JF, Jeng SC, Cheng WH, Chang CL, Lin WC, Wu LL, Lee HL, Chen RJ. Strahlenther Onkol., 2013 Jun[Epub ahead of print].

Molecular basis of cardiac endothelial-to-mesenchymal transition(EndMT): differential expression of microRNAs during EndMT. Ghosh AK, Nagpal V, Covington JW, Michaels MA, Vaughan DE. Cell Signal., 2012 May;24(5):1031-6.