粪便基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

中文名称：粪便基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from faeces
产品规格：50次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特沉淀系统提取粪便样本的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。独特沉淀剂可以有效去除样品中的杂质。提取的基因组DN**段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可直接用于PCR等其它分子生物学下游实验。

产品特点：
·适用范围广：适用于不同来源的固态或液态粪便样本。
·简单快速：1h内即可获得超纯的基因组DNA。
·高纯度：高效的沉淀剂去除腐殖酸等杂质，提取的DNA纯度很高，可直接用于下游实验。

试剂盒组成：

保存条件：室温（15-25℃)干燥条件下可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。
2．若缓冲液SA或SC中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，并摇匀后使用。
3．建议充分混匀样品，如果样品混匀不充分可能影响裂解效率，最终影响得率和比值。
4．如果样品吸水较多，可以等比例增加缓冲液SA和SC的量，如果缓冲液SA和SC不足，可单独购买。

使用方法：
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，缓冲液GFA中加入异丙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．称取粪便样本180-220mg至2 ml离心管中，并将管子置于冰上。
  注意：如果是液态样本则转移200 μl至离心管中。
2．向样本中加入500 μl缓冲液SA，100 μl缓冲液SC，15 μl Proteinase K，0.25g的研磨珠间歇振荡1min至样本充分混匀或使用TGrinder H24组织研磨均质仪（OSE-TH-01）混匀（6M/S的速度振荡30s，间隔30s，共2个循环）。
3．70℃孵育15 min，孵育期间震荡2-3次。
  注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可将温度提高至95℃以促进裂解。
4．涡旋15 sec，12000rpm （~13400×g )离心3 min，转移上清液至新的离心管中，加入10μl的RNase A，震荡混匀后室温放置5min。
5．加入200 μl缓冲液SH，震荡混匀，置冰上5min。
6．12000rpm （~13400×g )离心3 min。
7．将上一步所得上清液转移至新的1.5 ml离心管，加入等体积缓冲液GFA （使用前请先检查是否已加入异丙醇)。
8．将上一步所得溶液加入到一个吸附柱CR2中（吸附柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CR2放入收集管中。
9．向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CR2放入收集管中。
10．向吸附柱CR2中加入700 μl漂洗液PW （使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，吸附柱CR2放入收集管中。
11．重复操作步骤10。
12．将吸附柱CR2放回收集管中，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CR2置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
13．将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2-5 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CR2中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DN**段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DN**段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！