简介 SENSE总RNA-Seq试剂盒是一个文库制备试剂盒，整个流程仅需3小时，链特异性高于99.9%，可定位到相对应的基因组上，用于新的反义转录本的发现和定量，以及重叠基因的研究。文库的大小可在纯化阶段进行调整，不需要额外的文库大小选择试剂。试剂盒中含有96个外部标签，可以做到多重。文库兼容单端和双端测序。需要进行ploy(A)富集或rRNA去除的RNA的量是1ng-500ng。 工作流程 SENSE总RNA-Seq文库基于lexogen特异的链置换终止技术。文库生成起始于starter/stopper异源二聚体随机杂交，来进行RNA中Poly(A)的聚集和rRNA的去除。单管逆转录和连接反应会促进下一个异源二聚体杂交的开始，新的cDNA合成之后，遇到stopper之后终止。不需要RNA或者cDNA进行片段化，因为插入片段的大小有starter/stopper结合位点之间的距离决定的。当第二条链合成时，水解掉RNA，变成双链cDNA文库。磁珠对双链DNA文库进行纯化，并且进行文库大小的调整，去除第二条链合成反应组件。在文库扩增时加入接头序列以供簇生成所需。扩增足够量以便进行质量评估和测序。这个过程中可以加入外部标签，以便做多重测序，对文库进行纯化，除去会干扰定量的残留PCR组分。文库的定量用标准的Protocol，例如：毛细管电泳或者qPCR.