动物组织细胞DNA提取试剂盒

中文名称：动物组织细胞DNA提取试剂盒
英文名称：Animal tissue cell DNA Extraction Kit
产品规格：50次|100次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，能提取多种细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DN**段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

提取效率：
动物细胞培养液(样本量10^6～10^7)：5～30 μg
动物组织(样本量30mg)：10～30μg

试剂盒组分;

准备工作：
1. 准备55℃和70℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。
2. 按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液GA，缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、处理材料：
a. 培养细胞：贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(如用PBS缓冲液或类似缓冲液)，10,000 g离心1分钟，倒尽上清，加入200μl缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
b. 组织：取约30mg动物组织(脾组织用量应少于10 mg)加入到事先盛有200μl 缓冲液GA的1.5ml离心管中，用研磨杵彻底将组织研碎。
2、加入20μl蛋白酶K (20 mg/ml)溶液。
a. 提取细胞基因组时，加入蛋白酶K混匀后，55℃放置5-10分钟。
b. 提取组织基因组时，加入蛋白酶K混匀后，在55℃放置，直至组织溶解。
注：不同组织裂解时间不同，通常需1-3小时即可完成(鼠尾需要消化过夜),期间间歇颠倒混匀样品。
3、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液，混匀后室温放置2分钟。
4、加入220μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置一段时间后会消失。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，会影响DNA的纯度和得率，而且可能导致步骤6中离心柱堵塞。
5、加入220μl 无水乙醇，颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入乙醇后会产生絮状沉淀，可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理，容易导致步骤6中离心柱的堵塞。
6、将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，11000g离心2分钟，倒掉废液，吸附柱CG放回收集管中。
注：如果出现吸附柱堵塞现象，可将离心时间延长到5分钟。
7、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
8、向吸附柱CG中加入700μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
9、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液。
10、将吸附柱CG放回废液收集管中，11000g离心2分钟。
注：此步骤非常重要，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，11000g离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于100μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
12、DNA产物-20℃保存。

储存条件：室温，有效期12个月。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！