快速过滤法无内毒素大量质粒提取试剂盒（10preps)-核酸纯化-试剂-生物在线
Biomiga（中国）
快速过滤法无内毒素大量质粒提取试剂盒（10preps)

快速过滤法无内毒素大量质粒提取试剂盒（10preps)

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产品名称： 快速过滤法无内毒素大量质粒提取试剂盒（10preps)

英文名称： EndoFree plasmid ezFlow ezFilter maxi kit

产品编号： PD1522-01

产品价格： 0

产品产地： 美国圣地亚哥

品牌商标： Biomiga

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Biomiga（中国）
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试剂盒组分：
 
Catalog #
PD1522-01
Preps
10
ezBindTM Columns
10
Filter syringe (60 mL)
10
Buffer A1
110 mL
Buffer B1
110 mL
Buffer N3
40 mL
Buffer KB
110 mL
Buffer RET
230 mL
RNase A(20 mg/mL)
11 mg(550 μL)
Endofree Elution Buffer
25 mL
User Manual
1
 
保存条件：
 
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
 
注意事项：
  1. 质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N3,100%乙醇，相同体积的70% 乙醇和Endofree Elution Buffer.
  2. 转化菌：若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。切勿直接取冻存在4oC的菌进行培养。
  3. 柱结合能力：1 mg
  4. 对富含内源核酸酶的宿主菌（endA＋）如HB101, JM101, TG1等，需去核酸酶，请使用产品PD1713。
操作简明步骤：
  1. 取100 µL新鲜的菌液接种到150-200 mL (勿超过 200 mL)的LB培养基（含适量抗生素），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
  2. 加入10 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
  3. 加入 10 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。 
  4. 加入2 mL Buffer N3, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
  5. 将裂解液转移至过滤器中，放在一个50 mL的试管上静置10分钟。管中的白色絮状沉淀浮上来，对准50 mL的管向下压，使裂解液尽可能多的通过，有些裂解液可能会残留在沉淀中。注：静至10 分钟时RNase A将工作，排除RNA污染。若离心十分钟后再用过滤器过滤更有利于去除蛋白。
  6. 向裂解液中加入1倍体积的Buffer RET (即每20 mL裂解液加入20 mL Buffer RET) 及10 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混匀，需马上离心过DNA柱。
  7. 立即转移20 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下> 2,500 x g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。将剩余溶液转移至DNA柱中，室温下> 2,500 x g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复至所有的溶液通过DNA柱。
  8. 可选：向离心柱中加入10 mL Buffer KB，室温下> 2,500 x g离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
  9. 向离心柱中加入10 mL 70% 乙醇，室温下> 2,500 x g离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
  10. 将离心柱放回高速离心机中，室温下5,000 x g开盖离心10分钟，以彻底去除残留的乙醇。
  11. 将离心柱转至一个新的50 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL的Endofree Elution Buffer，室温放置1分钟，> 2,500 x g离心5分钟，以洗脱质粒DNA。将50 mL离心管中的洗脱液上柱再放置1分钟，> 2,500 x g离心5分钟。 两次洗脱将提高得率。