操作简单：可一步实现DNA的片段化和接头连接，仅需9 h即可实现从细胞到二代测序文库的转化

超高活性：兼具Protein A&Tn5活性，DN**段化活性极高

细胞起始量低：可兼容低至60个细胞，甚至单细胞

纯度高：蛋白纯度高、核酸残留低

1. CUT&Tag技术原理及应用

CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术，与后者相比，它具有显著优势，如：信噪比高，可重复性好，实验周期短（1天实现从细胞到文库构建），细胞投入量低等，尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。

CUT&Tag技术的实验流程简单，主要包括：①收集细胞；②分别孵育一抗和二抗；③孵育pA/pG-Tn5转座子（Hyperactive® pA/pG-Tn5 Transposon）；④激活转座子，进行DN**段化；⑤DNA提取；⑥文库扩增与纯化。

2. 转座子活性高

A：基因组DNA打断效果

如图所示，分别使用Vazyme #TD902中提供的pA-Tn5转座子与市售转座子（来自N公司）进行活性检测；投入50 ng人基因组DNA，各取1 μl转座子进行DN**段化（10 min），可以看出，Vazyme #TD902中的pA-Tn5融合酶切割DNA活性很高，文库产量显著高于N公司。

B：活细胞CUT&Tag实验 

如图B所示，投入10,000个HEK293细胞，分别使用Vazyme #TD902中提供的pA-Tn5转座子与市售转座子（来自N公司），按照各自说明书推荐的反应体系进行CUT&Tag实验；其中，pA-Tn5转座子使用的终浓度为0.04 μM，N公司转座子按照1:100进行稀释，一抗为H3K27me3（CST，#9733），二抗为Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271）。通过使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行文库分布检测，结果显示，Vazyme的pA-Tn5转座子切割活性明显高于N公司，可构建出与文献报道类似Ladder状CUT&Tag文库。

C： Peak 富集

如图C所示：将图B中的CUT&Tag文库进行二代测序分析，可以看出，使用Vazyme #TD902获得的文库信噪比显著高于N公司的文库。

3. 实验重复性好

如上图所示，投入不同起始量（1,000、10,000或100,000）的HEK293细胞，每种起始量做2个重复，按照Vazyme #TD902说明书推荐的反应体系进行CUT&Tag实验；其中，pA-Tn5转座子使用的终浓度为0.04 μM，一抗为H3K27me3（CST，#9733），二抗为Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271），阴性对照为与一抗同源的IgG（CST，#2729）。对上述文库样本进行二代测序，针对富集的reads进行pearson相关性分析，可以看出，平行样本之间的重复性较好。

Hyperactive® In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina是针对CUT&Tag技术定向开发的专用试剂盒。CUT&Tag技术是一种研究蛋白质-DNA互作的新方法，通过将Protein G或Protein A与经过工程学改造的超高活性Tn5转座酶融合，形成兼具双重活性的新型融合酶(Hyperactive® pG-Tn5/pA-Tn5 Transposase)，在抗体引导下精准靶向切割目的蛋白附近的DNA序列。与传统的ChIP-Seq相比，该技术具有细胞投入量低、实验周期短、信噪比高、可重复性好等优势，尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。试剂盒中所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。