DNA提取/RNA提取/基因合成

DNA提取

实验介绍
从新鲜组织、血液、细胞、细菌等多种材料中提取基因组DNA，不同种类的材料中提取的基因组DNA量不同，而且差异也比较大，一般材料的基因组

DNA提取情况如下

客户须知
1、细菌、细胞样品需新鲜培养；动物组织、植物组织等样品取样后需液氮速冻。

2、用于提取基因组DNA的血液样品在4℃下可保存一周，-20℃下可保存1个月。
3、实验样品最好使用干冰运输。

4、结果提供基因组DNA、完整实验报告（电泳照片、OD值测定结果等）。

5、不同抗凝种类、抗凝程度、冻存时间等因素会导致血液样品之间差异较大、产量不同和价格有所不同。

实验周期
大约一周，根据量的多少而有所不同。

RNA提取

实验介绍 
TRIZOL试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。

实验步骤
在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时，将存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
1. 提取组织RNA 时，每50～100mg 组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA 时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106 个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；
2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP 管中,在室温15~30C下放置5 分钟；
3. 在上述EP 管中，按照每1ml TRIZOL 加0.2ml 盖上EP管盖子，在手中用力震荡15 秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3 分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15 分钟；
4. 取上层水相置于新EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.5ml 异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10 分钟,12000g（2℃～8℃）离心10 分钟；
5. 弃上清，按照每1ml TRIZOL 加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5 分钟，弃上清；
6. 让沉淀的RNA 在室温下自然干燥；
7.用Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。

基因合成

以前，实验室通常用PCR和RT－PCR的方法来获取某个基因片段，但是往往因为标本和模板等原因无法钓取该段基因。如今，我们采用化学合成的方法人工构建基因片段，即：全基因合成拼接技术。可以为广大的科研朋友服务。
基因合成是指在体外合成双链DNA分子的一门技术,与寡核苷酸合成有所不同，寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围50bp-12 kb。可根据客户需求，我中心可以提供全基因合成服务，速度快、周期短、价格优惠。合成的基因可以根据客户的需求连接到不同的载体上，最终提供的产品包括菌株以及冻干的质粒和全基因完整的测序报告。
全基因合成的适用范围：
A: 自然界中无法以常规实验手段得到的基因
B:研究人员通过自己的意愿设计基因序列,以得到自然界中不存在的基因
C:对已知基因序列进行大量密码子优化重排,以期达到对该基因进行高效表达或获得新的生物特性等研究目的
服务优势：
A:合成基因最长已达到10.5KB,已完成基因超过10000条
B:可以合成重复序列(重复次数无限制).高GC(小于80%).发夹(参照每200bp小于3个发夹为限).连续单一碱基重复(GC小于15个,AT小于20个)等富含特殊结构的基因注:特殊结构基因合成的相关数据是根据我公司曾经成功合成过的基因序列所做的总结,以作为您设计基因序列时判断是否能顺利合成作为参考,具体还需以实际基因序列来定
C:基因可以克隆到客户提供或指定的表达载体上
D:免费提供基因结构设计.基因密码子优化,基因克隆表达方案设计等基因合成相关咨询服务.
全基因合成操作程序：
1、我们将对您需要合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有重复序列，然后根据序列的具体情况设计合成方案。
2、在得到您认可后，我们将立即进行单链Oligo DNA 合成，DNA片段拼接等工作。然后把全长基因克隆到载体中，再通过DNA测序确认合成基因的正确性。
3、测序结果如果发现有错误位点，我们会采取相应的技术手段进行修复校对，保证整个序列的正确性。

结果提供：
A: 基因合成报告单一份
B: 含目的基因的质粒(不少于1ug)一份
C: 含目的基因的菌株一份
D：基因合成的测序图谱一份

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