单克隆抗体制备/多克隆抗体制备/蛋白表达纯化

单克隆抗体制备

单克隆抗体（单抗）应用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫动物的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，通过HAT筛选，ELISA抗体检测，有限稀释克隆化，选择出具有分泌抗体功能又能无限繁殖的来源于单一B细胞的杂交瘤细胞，并产生抗体，就是单克隆抗体。单抗的最大优势是它的特异性、均一性、高效性和无限供应性。在免疫学、医学、生物学等领域的基础研究和临床医学上，包括对疾病(包括癌症)的诊断、预防和治疗等方面，均显示出巨大的生命力。

实验步骤：

1. 每种抗原免疫5只Balb/c小鼠
2. 选取ELISA效价较高的小鼠，取脾细胞与SP2/0细胞融合
3. 进行2~4次克隆化及ELISA筛选，确保杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性
4. 抗体亚类鉴定
5. 至少选择2株杂交瘤细胞的冻存，并免费提供一年的保种服务

抗体的应用：制备的抗体可能用于ELISA、WB、IHC、IP等实验。

客户需提供的材料及信息:

• 客户需要提供2mg以上的纯化蛋白质，纯度≥90%(SDS-PAGE检测)，若带融合标签需说明并提供筛选蛋白
• 如为多肽，客户要提供两种偶联不同蛋白质的多肽各4mg，未偶联多肽1mg，偶联多肽纯度≥85%

结果提供：

实验报告                   

免疫前血清（20μl）         

免疫后血清（20μl）

抗体上清（至少3株,1ml/株）   

杂交瘤细胞（3株）           

抗体亚型

如需要纯化的客户增加如下结果：

纯化抗体（3株）(纯度≥90％,浓度≥1mg/ml,每株5mg）   免疫效价   抗体亲和力常数

相关说明：

A、免疫原可以为重组蛋白、天然蛋白、合成多肽、偶联小分子等。

B、客户需要承诺外的细胞株，每株价格为500元。

C、客户需要对承诺外的细胞株抗体进行纯化，价格为1500元/5mg（单独报价为1800元）。

D、如客户需要非IgG类的其他细胞株，每株价格500元，纯化费用500元/5mg（CAAS法纯化）

多克隆抗体制备

多克隆抗体存在于免疫动物的血清中，可通过直接分离血清获得。由于具有可识别多个表位、可引起凝集反应、沉淀反应等优点，被广泛应用于免疫学诊断领域。比如经常用到的Western blotting实验中的酶标二抗和ELISA实验中的包被抗体。而且制备费用也较单克隆抗体低。
我中心专业从事抗体生产和定制服务，您提供抗原，我们提供给您满意的抗体产品；如果您只有半抗原，那么我们可以为您提供KLH或BSA的交联服务，提高免疫应答水平，获得高效价的抗体产品。

服务特色：
稳定的生产管理系统，保证成功率。如果最后没有达到承诺的效价，不收取任何项目费用。如果为多肽项目，可以免费为客户做序列分析及多肽选取。

应用：
制备的抗体可能用于ELISA、WB等实验。

客户需提供的材料及信息

1、客户需要提供2mg以上的纯化蛋白质，纯度≥90%(SDS-PAGE检测)，若带融合标签需说明并提供筛选蛋白。

2、如为多肽，客户要提供两种偶联不同蛋白质的多肽各4mg，未偶联多肽1mg，偶联多肽纯度≥85%。

蛋白表达纯化

随着蛋白药物市场的快速发展和蛋白质组学研究的深入，高纯度活性蛋白的需求越来越大。威斯腾生物中心组建了一支由多名具深厚生物技术基础与制药企业工作经验的留学归国人员和国内专家为核心的团队。可为国内外客户提供从基因到蛋白纯化的整套技术服务。

威斯腾服务特色

稳定而多样的表达系统：威斯腾生物已建立整套的基因克隆与表达体系，无论是单个基因的克隆、表达与纯化，还是多个基因高通量的基因克隆、表达和纯化，均能选用适合您试验（科研项目）需要的表达系统和合适的表达载体为您提供优质的服务。

多种纯化方式：可为客户提供多种蛋白纯化服务，纯化方式包括亲和层析纯化、凝胶过滤、离子交换、疏水层析等，客户可根据需要选择合适的纯化方式。

专业的团队和良好的信息管理体系：专业的基因克隆、蛋白表达与纯化技术人员与团队，具有丰富的表达和纯化经验，可为客户解决各种瓶颈问题, 良好信息管理体系使我们能够为客户提供成熟、高效的基因克隆服务。

操作流程

大肠杆菌和酵母蛋白表达系统：

合成基因（另外收费）或者客户提供

SDS-PAGE检测表达

Western blot检测表达（可选）模板(cDNA、基因组DNA、质粒等)

构建表达载体

筛选阳性克隆

表达优化和可溶性分析

提供结果

１、构建的表达载体及测序报告

２、SDS-PAGE结果

３、筛选的表达菌株

４、Western blot结果

５、实验流程及结果

６、2ml 1.0×108pfu/ml的病毒（利用昆虫杆状病毒蛋白表达系统表达时）

稳定表达细胞株（哺乳动物细胞）

威斯腾实验服务流程

威斯腾生物服务项目