Hieff NGS^® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina^®

产品信息

产品描述

Hieff NGS^® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina^®是Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer。 2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer，配合Hieff NGS^® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®（Cat#12201）使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存，有效期1年。

注意事项

1）本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2）本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。

3）本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer，可以构建96种不同组合的双端Index标记文库，每个Set可构建192个DNA文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12613中的i5 Index Primer（或i7 Index Primer）与Cat#12614中的i7 Index Primer（或i5 Index Primer）组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。

4）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。

5）使用Hieff NGS^® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina^®试剂盒构建的DNA文库结构如下：

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ^® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^® 试剂盒操作说明进行。

接头连接（Adapter Ligation）：

在末端修复产物两端连接特定的Illumina^®接头，即Hieff NGS^® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®操作步骤3.2。

1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量；

表1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

【注】：Input DNA 摩尔数（pmol）≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度（bp）]

2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；

3. 配制表2所示反应体系；

表2. Adapter Ligation反应体系

【注】：*Ligation Enhancer比较粘稠，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。

**本公司接头浓度（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）与常规商业化试剂盒一致，皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示，计算接头用量。

4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；

5. 将PCR管置于PCR仪中，设置表3所示反应程序，进行接头连接反应：

表3. Adapter Ligation反应程序