Tris-HCl SDS-PAGE分离胶配胶液(4×)-蛋白分析-试剂-生物在线
上海生孚生物技术有限公司
Tris-HCl SDS-PAGE分离胶配胶液(4×)

Tris-HCl SDS-PAGE分离胶配胶液(4×)

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产品名称： Tris-HCl SDS-PAGE分离胶配胶液(4×)

英文名称： Tris-HCl SDS-PAGE

产品编号： SF0045

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产品产地： 中国

品牌商标： 生孚生物

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上海生孚生物技术有限公司
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根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1        
I 灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表2）        
1. 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。        
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据        
    实际情况选择。        
2.将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。        
3.加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。         
4.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端        
  1.5cm或距梳齿约0.5cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，使        
  凝胶表面保持平整。        
5. 静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。        
II 灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表3）        
1.去除覆盖在分离胶上的水层。        
2. 将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混合。        
3. 加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。        
4. 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃的顶端。        
5. 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。        
6. 静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。        
7. 待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。        

8.进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围            
SDS-PAGE分离胶浓度     最佳分离范围    
6%胶   50-150kD    
8%胶   30-90kD    
10%胶   20-80kD    
12%胶   12-60kD    
15%胶    10-40kD    
             
附表2.配制Tris-Gly SDS-PAGE分离胶            
分离胶浓度 凝胶体积 所需各组分体积（单位：ml）
双蒸水 30%Acr-Bis（29:1） 分离胶缓冲液（4×） 10%APS TEMED
6% 5ml 2.75 1.0 1.25 0.05 0.004
10ml 5.5 2.0 2.5 0.1 0.008
15ml 8.25 3.0 3.75 0.15 0.012
20ml 11 4.0 5 0.2 0.016
8% 5ml 2.42 1.33 1.25 0.05 0.003
10ml 4.8 2.7 2.5 0.1 0.006
15ml 7.25 4 3.75 0.15 0.009
20ml 9.7 5.3 5 0.2 0.012
10% 5ml 2.08 1.67 1.25 0.05 0.002
10ml 4.17 3.33 2.5 0.1 0.004
15ml 6.25 5 3.75 0.15 0.006
20ml 8.3 6.7 5 0.2 0.008
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