Indo-1, AM细胞可渗透钙离子荧光探针
产品名称: Indo-1, AM细胞可渗透钙离子荧光探针
英文名称: Indo-1, AM,Cell Permeable
产品编号: 40775ES50
产品价格: 0
产品产地: 翌圣生物
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2023-08-17T13:40:59
使用范围: null
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产品信息
产品描述
Indo-1是一种细胞生物学常用的钙离子荧光探针,与Fura-2为目前使用最广泛的比率法测定的钙荧光指示剂,Indo-1能特异性地结合Ca2+,同时可发出荧光,结合Ca2+后的最大发射波长从结合前的475nm向400nm(Ca2+饱和时)偏移,该信号变化可被流式细胞仪较好的捕捉:在氩离子激光器的351-364光谱范围内单一波长激发该探针,在400nm和475nm的波长处分别检测结合钙离子和未结合钙离子的荧光信号,通过二者荧光强度的比率测定钙离子浓度。
由于Indo-1是极性大的酸性化合物,无法进入细胞内,为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯,使其成为Indo-1/AM,该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷,极大的提?了细胞渗透性。在细胞内,Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合。
产品性质
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃避光干燥保存,有效期6个月。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
需要试剂准备
1) (可选)配制Pluronic F-127母液:100mg Pluronic F-127粉末(Cat No. 60318ES60)中加入0.5ml DMSO,配制成20%(w/v)的DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不要冷藏。如果有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。
2)Hanks•balanced salt solution(HBSS,不含Ca2+, Mg2+)(Cat No. 60161ES76)
使用方法(本实验方案仅供参考,为得到最理想实验结果,需根据具体的实验情况优化实验条件。)
1)Indo-1/AM储存液的配制
利用高质量无水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2-5mM的储存液,该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存。每次使用前需回温至室温。
【注】:① 因为Indo-1/AM在水中的溶解性和稳定性较差,不可用水溶性缓冲液配制Indo-1/AM储存液。
② 溶解用的DMSO需要保证新鲜无水,否则将会导致AM 体水解,使荧光染料无法进入细胞,影响实验效果。
2)Indo-1/AM工作液的配制
利用合适缓冲液(如Hanks & Hepes )将Indo-1/AM稀释成1-10μM的工作液,具体稀释方法如1 mM母液配制1 ml浓度为4 μM工作液,用1 ml 缓冲液稀释4 μl 1mM母液即可,混匀。
【注】:① 典型工作液浓度为0.1-5μM,对于大多数细胞,我们推荐加载浓度4-5μM,具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。
② Indo-1/AM工作液需现配现用,避免反复冻存。
3)(可选)如果Indo-1/AM进入细胞的效果不好,可向 Indo-1/AM/DMSO 储存液中加入适量20% Pluronic F127溶液,最终稀释至其终浓度为0.02-0.05%,Pluronic F127 可以防止 Indo-1/AM在缓冲液中聚合并能帮助其进入细胞。
【注】:Pluronic F127可降低Indo-1/AM的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议将其加入储存液长期保存。
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