间充质干细胞无血清培养基

  MSC NutriStem® XF Medium

一、目的：利用间充质干细胞无血清培养基培养分离脐带间充质干细胞

二、材料：新生儿脐带

三、主要仪器：医用手术器械，生物安全柜，CO2培养箱，6孔培养板，T25培养瓶

四、试剂：

表1 MSC NutriStem® XF Medium

表2 建议选用试剂

五、实验前准备：

5.1  完全培养基的准备

5.1.1  冻存的MSC NutriStem® XF Supplement在室温或2-8℃解冻，避免反复冻融。

5.1.2  配制：MSC NutriStem® XF Basal Medium（培养基）：MSCNutriStem® XF Supplement（添加物）：青链双抗=500ml：3ml：5ml，4℃保存，2周内使用。

注1：双抗非必须，建议原代（P0）时使用。

注2：培养基含L-Glutamine，贮藏时避免长期照光。

5.2  包被培养皿

5.2.1  使用DPBS溶液（货号：02-023-1A），将MSC贴壁试剂稀释100倍（1:100）。

5.2.2  参照表3，加入适量的1X MSC贴壁试剂涂层培养皿或板。

表3  涂层过程中贴壁试剂建议使用量

注1：涂层的培养皿需在无菌条件下2℃-8℃储存，需在一周内使用。（标示红色为原厂建议使用量，经过实验测试后可减半使用）  注2：包被期间， 注意包被液不可以干掉！

5.2.3  轻轻摇动培养皿，确认贴壁试剂均匀分布在培养皿表面后，用封口膜包裹涂层的培养皿。

5.2.4  在2-8℃孵育过夜；或者在CO2培养箱，37℃, 至少孵育30分钟。

5.2.5  接种前, 吸除贴壁试剂，再用DPBS轻轻冲洗培养皿，即可接种细胞。

5.3  制备1X大豆胰酶抑制剂

5.3.1 使用无菌的DPBS，将50X大豆胰酶抑制剂（03-048-1C）稀释成1X。

六、使用范例：

6.1  UC-MSC原代培养

6.1.1  无菌条件下取新鲜脐带，用DPBS漂洗净血迹 (如怀疑污染，可先在75%医用酒精中浸泡 2min)。

6.1.2  置250px 培养皿中，剪成1~50px脐段，剔除血管，用DPBS洗净血迹，再剪成1mm3组织块。(图 1)

6.1.3  用无菌滴管吸取少量细小组织块均匀散布在 6 孔板 2 个孔中。

6.1.4  37℃，5% CO2培养箱孵育 30min，以使组织块粘贴在培养皿壁上。

6.1.5 &nb