对技术变量的量化和控制是任何实验的重要组成部分。在RNA提取、文库构建、测序等步骤中最小化技术变量，可以更加准备的量化转化本的浓度，允许更多的重复验证和样品对比。该技术报告验证SENSE mRNA-Seq文库制备试剂盒对转录本定量的精确性和可重复性。 试验 该实验分析结果可从网上获取。加入ERCC质控的总RNA，生成7个标记NGS文库，在Illumina HiSeq的同一个lane进行测序。由起始量不同的RNA生成文库，不同水平的RNA都做了重复试验。用cufflinks计算出所有ERCCs的FPKM值，不管加入RNA的起始量的多少，可以对比出任何两个文库的线性回归。 即使RNA的起始量不同，平均R2（0.953±0.011标准差）和平均斜率（0.967±0.035）都很高，表明该实验有很高的重现性。相同质量的RNA生成的文库和不同质量的RNA生长的文库相比，并没有明显差异（i.e.相同质量的RNA文库并不比不同质量的文库的R2高）。结果表明，不同起始量的RNA并不影响实验的重现性，甚至在起始量差别很大的情况下也能保证转录本的精确定量。这一特点可保证即使有些样本可使用总RNA量很低时，也能精确地进行转录本的定量。 结论 SENSE mRNA-Seq 文库制备试剂盒生成的文库有很低的技术变量和高重现性，对转录本进行精确定量。SENSE文库制备试剂盒的转录本定量更加精确，并且不受加入起始RNA量的影响。